有哪些辦法可以對細(xì)胞進(jìn)行分選

　　細(xì)胞分選是根據(jù)細(xì)胞所具有的特性將某種特定的細(xì)胞亞群從混合的細(xì)胞樣品中分離出來的一種技術(shù)，是細(xì)胞學(xué)研究的重要課題。在需要對某種特定的細(xì)胞進(jìn)行功能分析時，如對細(xì)胞培養(yǎng)上清液通過ELISA分析檢測細(xì)胞分子、細(xì)胞共培養(yǎng)檢測細(xì)胞功能等研究都以獲得高純度的目的細(xì)胞為前提。

　　常用的細(xì)胞分選的方法有兩種：流式細(xì)胞分選和免疫磁性細(xì)胞分選。

　　一、流式細(xì)胞分選

　　流式細(xì)胞分選是在流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞表型的基礎(chǔ)上，使用充電分選技術(shù)以實(shí)現(xiàn)多種特定表型細(xì)胞的分離。具有分選參數(shù)多、群體多、純度高、靈活性強(qiáng)等優(yōu)勢。分選后細(xì)胞可做進(jìn)一步分子生物學(xué)研究如熒光定量PCR、WB、細(xì)胞培養(yǎng)等。

　　基于流式細(xì)胞術(shù)的技術(shù)基礎(chǔ)，根據(jù)顆粒特性實(shí)現(xiàn)細(xì)胞分選而廣泛應(yīng)用于免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、腫瘤學(xué)、血液學(xué)、藥物開發(fā)以及環(huán)境檢測等各方面科學(xué)研究和工作中。

　　二、免疫磁性細(xì)胞分選

　　免疫磁珠細(xì)胞分選是基于細(xì)胞表面抗原能與連接有磁珠的特異性抗體結(jié)合的特性，在外加磁場中，通過抗體與磁珠相連的細(xì)胞被吸附而滯留在磁場中，而無該種表面抗原的細(xì)胞由于不能與連接著磁珠的特異性抗體結(jié)合不具磁性，從而不在磁場中停留達(dá)到細(xì)胞分離的目的。磁珠細(xì)胞分選所需設(shè)備簡單，對技術(shù)人員要求不高，分選所得細(xì)胞靈敏度高、純度好且細(xì)胞活性和復(fù)蘇率較好，對于下游應(yīng)用影響較小，應(yīng)用前景較廣。

　　免疫磁性分選策略

　　免疫磁珠細(xì)胞分選依據(jù)可以分為兩類。一類是根據(jù)所標(biāo)記細(xì)胞的不同分為陽性分選和陰性分選；另一類是根據(jù)分選方法不同分為直接分選法和間接分選法。

　　(1)依據(jù)標(biāo)記細(xì)胞的不同分類

　　陽性分選：將目的細(xì)胞相對應(yīng)的特異性抗體與磁珠相連后加入混合細(xì)胞懸液進(jìn)行孵育。在抗原抗體發(fā)生特異性結(jié)合后，以磁分離的方式將目的細(xì)胞分離出來。

　　陰性分選：從多細(xì)胞懸液中分離去除非目的細(xì)胞最后得到目的細(xì)胞。但在靶細(xì)胞的細(xì)胞數(shù)所占比例比較小時，分選過程中存在的非特異性吸附會直接導(dǎo)致目的細(xì)胞的損失。

　　復(fù)合分選：是聯(lián)合兩種以上的分選策略進(jìn)行分選，例如先陰性分選去除非目的細(xì)胞，再陽性分選分離目的細(xì)胞等。此種方法主要用于細(xì)胞亞群的分選或是分離得到高純度的稀有細(xì)胞。

　　2)根據(jù)不同分選方法分類

　　直接分選法：將抗體或親和配體直接包被在磁性顆粒上，形成免疫磁性復(fù)合顆粒。將其與多細(xì)胞懸液混合孵育之后，目的細(xì)胞會特異性的結(jié)合在免疫磁珠上，在外加磁場的作用下，帶有磁珠的目的細(xì)胞滯留在磁場中，而非目的細(xì)胞則會被去除。

　　間接分選法：目的細(xì)胞首先與對應(yīng)的一抗孵育，激活細(xì)胞之后清洗去除未結(jié)合的一抗，后再加入預(yù)先包被有二抗的磁性顆粒與活化后的細(xì)胞進(jìn)行孵育，一抗與二抗之間的相互作用使得磁粒結(jié)合在目的細(xì)胞上，同樣在磁場作用下滯留目的細(xì)胞達(dá)到分選目的。